首先,带大家温故下酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA),此方法可用于研究领域中的许多靶标,包括细胞因子,趋化因子,生长因子,磷酸特异性靶标,免疫球蛋白,免疫肿瘤学和神经生物学。由于技术方法成熟,操作流程简单,此方法学深受广大科研工作者青睐。
那么,ELISA实验中具体又分为哪几种检测类型呢?
01 夹心法
①将含有已知抗体的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里,洗涤一次;
②加待测抗原,如两者是特异的,则发生结合,然后把多余抗原洗除;
③加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体,使形成“夹心";
④加入该酶的底物,若看到有色的酶解产物产生,说明在孔壁上存在相应的抗原。
02 间接法
此法是检测抗体常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上,加入待测血清(抗体)与之结合,洗涤后,加酶标抗体和底物进行测定。
03 竞争法
此法主要用于小分子物质、激素、药物及半抗原的定量测定。以测定抗原为例,将特异性抗体吸附于固相载体上,加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原,使二者竞争地与固相抗体结合,经过洗涤分离,最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。
到这里我们应该会问一句,什么叫“一步法" ?
不要着急,小Z先用“一步法"跟传统方法做个对比:
以上图例,相信大家很明显的看出“一步法"优化了操作步骤,缩减了操作时间,避免了不必要的误差。
此刻你们脑海里面应该飘过很多问号吧?
小Z再给你们剖析一下“一步法" 的优化方案
梯度标准品(即用型)试剂盒提供已知浓度的6支标准品,可直接使用;
样本充足的情况下,离心后可以直接加样,无需样本稀释,避免污染;
一次性洗板,简约时间,减少误差;
直接读数,90分钟搞定ELISA,实现时间上“质"的飞跃;