固氮酶检测能够直接反映固氮微生物的固氮能力　

　　在自然界中，固氮微生物可以在固氮酶的作用下，通过生物固氮(以自生固氮、共生固氮或联合固氮的形式)将大气中的分子氮转化为氨，参与氮循环。研究固氮微生物不仅有利于氮肥的合理施用，而且有利于微生物肥料的发展。固氮酶检测能够直接反映固氮微生物的固氮能力。

　　

　　生物固氮是固氮微生物*的生理功能，由固氮酶催化。固氮酶活性的检测对于生物固氮工程的研究具有重要意义。以乙炔还原法为基础，为研究人员提供了固氮酶活性、海藻固氮菌、土壤固氮酶活性和固氮酶检测。
 

　　

　　取适量样品于带有异丁基橡胶塞的密封瓶中，抽出部分空气，注入等量的标准乙炔气体，调节光照时间和温度进行培养，培养后取密封瓶中的气体进行检测。乙烯含量用外标法定量，配置5种不同浓度的乙烯气体进行检测。根据浓度和峰面积建立标准曲线，每批样品都要重新绘制标准曲线。方法采用标准样品法进行质量控制。每10个样品用已知浓度的标准乙烯气体样品进行测试，同一样品平行测试5次，计算准确度和精密度，准确度和精密度应在20%以内。

　　

　　1、检测原理:乙炔还原法(固氮酶能将乙炔气还原成乙烯气)

　　

　　2、测试平台:气相色谱仪-氢火焰离子检测器(GC-FID)

　　

　　样品要求:

　　

　　1、土样(≥8.0g/样；如果待测含水量≥10.0g/个样品)，用干冰或冰袋运输。

　　

　　2、根瘤样品(≥1.0g/样品)在液氮中冷冻，在-80℃下储存，在干冰中运输。

　　

　　3、细菌(≥15ml/样品)，无氮培养基活化，冰袋运输。

　　

　　固氮酶检测实验方案:

　　

　　1、称取约1.0g结节组织，放入20mL空瓶中。用注射器抽取2ml空气后，用注射器注入2ml乙炔气体。样品中乙炔的浓度为10%。

　　

　　2、将瓶子放在30℃的恒温水浴中60分钟，避光。