无血清细胞冻存液是一种特殊的细胞保存液。
1、成分明确:不含动物来源性蛋白和血清,有效减少细菌、病毒和支原体等污染风险。
2、高安全性:由于不含有异源成分,因此具有更高的安全性,适用于体内研究。
3、细胞存活率高:含有DMSO、葡萄糖等细胞营养成分,有助于提高细胞的存活率和活力。
4、适用性广:通用于各种动物细胞株,包括肿瘤细胞和常规细胞,也适用于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。
正确使用无血清细胞冻存液的步骤如下:
1、细胞收集与离心:
使用常规方法收集处于对数生长期的细胞。
对于贴壁细胞,使用胰酶或EDTA消化,收集到试管中。
将细胞悬浮液离心,通常条件为1000-2000rpm,4℃,持续3-5分钟,保留细胞沉淀。
2、加入冻存液与混合:
向细胞沉淀中加入适量的无血清细胞冻存液。
轻柔混合均匀,避免产生气泡和剪切力,使细胞浓度达到适宜范围。
3、分装与冻存:
将混合均匀的细胞悬液分装到冷冻保存管中。
直接放入-80℃超低温冰箱中进行冷冻保存,或先-80℃过夜再转移至液氮罐中。
4、注意事项:
操作过程需在超净工作台内无菌进行。
加入细胞后应尽快移至-80℃保存,减少室温存放时间。
控制好胰酶的消化时间,避免消化过度。
重悬细胞时要轻柔且充分,避免细胞损伤和成团。
遵循上述步骤和注意事项,可以确保无血清细胞冻存液的正确使用,提高细胞冻存效果。